用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆,经抗生素筛选为何会出现假阳性?如何防止假 阳性的产生?麻烦有经验的大哥大姐详细给教导一下!

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/29 01:39:41
用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆,经抗生素筛选为何会出现假阳性?如何防止假 阳性的产生?麻烦有经验的大哥大姐详细给教导一下!

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用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆,经抗生素筛选为何会出现假阳性?如何防止假 阳性的产生?
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用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆,经抗生素筛选为何会出现假阳性?如何防止假 阳性的产生?麻烦有经验的大哥大姐详细给教导一下!
质粒被切以后,和目的基因放在一个体系中,加入DNA连接酶,有可能质粒在切口处重新接上.这样的 质粒上面有标记基因,但没有目的基因.因此,这样的质粒导入受体细胞后也有抗性.这就是假阳性.还有一种假阳性,就是目的基因和质粒在连接时,方向接反了.如何防止假阳性,方法有三种.第一,用同尾酶去切,可防止质粒自身环化;第二、用双标记基因法,如抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因两个标记基因,这个方法一句话给你说不清楚,先简单了解一点;第三、用基因探针去检测,这个方法是最可靠的.

提质粒,PCR、酶切检测下,基本可以排除假阳性的能不能具体点呢抗生素筛选只是选择转入载体了的细菌,但是否是连入了目的片段的重组载体是不能鉴别出来的。你可通过菌落PCR来检测细菌内是否含有目的片段,但由于菌落PCR容易出现假阳性,一般酶切结果会更可靠,当然测序更妥了。...

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提质粒,PCR、酶切检测下,基本可以排除假阳性的

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影响质粒载体进行外源DNA片段克隆是主要考虑的有哪些因素 用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆,经抗生素筛选为何会出现假阳性?如何防止假 阳性的产生?麻烦有经验的大哥大姐详细给教导一下! 载体质粒不就是外源DNA的载体吗? 在基因工程研究和应用中,为什么必须使用载体来克隆外源DNA片段?详细一点 谁说说质粒载体pet 22b的一些特点以及它作为质粒载体在DNA克隆中的优势? 应用COS质粒载体克隆外源基因的一般程序是什么? 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因,并使之在大肠杆菌中进行 请描述用载体pUC18来克隆DNA片段的过程.在这个克隆实验中,你怎样选择含有克隆片 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因.1.如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因并在大肠杆菌中进行表达?简要说明试验中可能遇到的问题及可能的解 采用通用引物对插入到质粒克隆载体中的基因片段进行测序,t3 引物读出来的数据是该基因的5'端还是3'端?采用通用引物对插入到质粒载体(pBluScript)中的基因片段进行测序,t3 引物读出来的数据 设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤 DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 在基因工程研究和应用中,为什么必须使用载体来克隆外源DNA片断? 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码蛋白的基因,并使之在大肠杆菌中表达 如何将两个外源基因导入到一个质粒载体?有一段平末端编码人VEGF基因的DNA片段,怎样将其插入到含有EcoRI和BamH I限制位点的PET28a载体中去?插入后重组载体转化大肠杆菌DH5.我们要插入这个外源 质粒载体在DNA测序上有何用途? PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么:经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 最近在做转化实验,转化到大肠杆菌里面,请问一下什么是假阳性啊是不是指载体没有与目的基因连接,就直接进行转化,如果是这样,在进行“蓝白斑”筛选时,原理是当外源片段插入到载体质粒